干貨丨關于中藥禁用農藥檢測混標選擇及使用的一些小建議

《中國藥典》2020版 已經正式實施，關于農殘檢測有很大變化，主要是通則2341增加了第五法禁用農藥的檢測方法，隨著藥典的實施，植物類中藥及飲片中不得檢出33種（55個）目標物，很多中藥企業都在開始開展這個實驗，但是很多老師在實驗第yi步，選擇標準品這一部分就被難住了，市場上很多種混合對照品，那應該如何合理選擇呢？今天小編進行了一些問題整理，希望可以幫助大家。

01 我們要檢測的農藥目標物有哪些？

相信很多老師通過對藥典的解讀也都有所發現，中藥材禁用農藥的檢測涉及到33種農藥，因包含同分異構體和代謝產物等，總計共55個目標物；根據檢測儀器又分為了氣質質檢測組，35個；液質質檢測組，31個；其中11個目標物可以同時使用兩種儀器檢測。具體情況見下表：

02 市場上有哪些商品化的中藥禁用農殘混合對照品溶液？

目前市場上許多廠家都推出了針對《中國藥典》2020版 通則2341第五法的定制化混標產品，按照分組和濃度情況可以分為以下幾類：

①、按照目標物的檢測儀器分類，主要分為3種產品，分別是針對GC-MS/MS檢測的35種農藥混標、針對LC-MS/MS檢測的31種農藥混標、針對所有目標物的55種禁用農藥混標。

②、按照目標物濃度分類，主要分為2種產品，一種是所有目標物濃度都相同的混標產品，此類產品的濃度通常有10ppm和100ppm；另外一種是所有目標物濃度不*相同的混標產品，此類產品的濃度通常為2-20ppm或20-200ppm。

《中國藥典》2020版 通則0212中對于植物類中藥材中禁用農藥的限值是不*相同的，因此，以上各種混標產品中chang見的當屬不同濃度的混標產品，此類產品通常是根據藥典標準中的限值要求進行倍數擴大配制得到。下面以安譜實驗 CDAA-M-490407-TX-1.2ml 55種農藥混合對照溶液產品為例進行簡單介紹。下圖是混合對照溶液的濃度和CAS號信息。

從表中可以看出，混合對照品溶液的濃度范圍為2-20ppm，其中大部分目標物的濃度都是依據藥典限值要求進行了200倍的擴大，但涉及到同分異構體和代謝物的農藥時會存在一些差異，因為這些目標物的限值是2-4個物質的和，例如表中四個六六六的濃度均為10mg/L，為限值0.1mg/kg的100倍；甲ban磷、甲ban磷砜和甲ban磷亞砜三個物質的濃度均為4mg/L，為限值0.02mg/kg的200倍。因為藥典中并未規定對照品溶液的具體濃度，不同廠家生產的混合對照品溶液中對于此類以和計限值的農藥目標物，其具體濃度設定可能不*相同，因此大家在購買后一定要對其COA證書進行仔細閱讀，確定每個目標物的濃度信息。

03 標準曲線的濃度是多少，如何進行配制？

藥典標準中對于對照品溶液的制備要求如下圖所示，標準要求使用基質標準曲線，給出了配制標準曲線的體積信息，但并沒有給出具體的濃度信息。

下表中給出55種禁用農藥混合對照品溶液的一種標曲配制濃度信息表，僅供大家參考，各位老師可以根據自己的實際情況進行標曲濃度的設定。

表中使用商品化的2-20ppm混合標準品，使用時可以按照標準要求，取1mL標準品溶液，用乙腈定容至20mL得到配制標準曲線使用的混合對照品貯備溶液（0.1-1ppm），然后根據藥典標準方法，分別取10、20、50、100、150、200μL的貯備溶液進行基質標準曲線的配制。

如果使用更高濃度的商品化的20-200ppm混合標準品，使用時則需要注意濃度信息，不可按照藥典標準方法進行配制，只需準確量取0.1mL標準品溶液，用乙腈定容至20mL得到配制標準曲線使用的混合對照品貯備溶液（0.1-1ppm），然后根據藥典標準方法，分別取10、20、50、100、150、200μL的貯備溶液進行基質標準曲線的配制。

按照上述的標線配制方法，使用直接提取法（包含固相萃取法）時，通則0212規定的目標物限值對應的濃度是標線第3點（50μL）；使用QuEChERs方法時，通則0212規定的目標物限值對應的濃度是標線第4點（100μL）。

04 加標實驗如何開展，需要的加標濃度是多少？

通則2341第五法中要求55個目標物的回收率在70%-120%，因此日常檢測實驗中需要開展加標回收率實驗。加標實驗即在樣品粉碎稱重后，向樣品粉末中加入適量的混合標準品溶液，混勻后按照供試品溶液的處理方法同時處理。

加標濃度建議按直接提取法（包含固相萃取法）和QuEChERs法進行分類：

直接提取法（包含固相萃取法）：

1、取0.5mL 20-200ppm的混標溶液，乙腈稀釋至10mL，得到1-10ppm的加標用混合標準使用溶液。

2、稱取5.0g 樣品后，加入0.05mL 1-10ppm混標使用溶液（e.g. 水胺硫磷為5ppm），經前處理后，供試品溶液的上機濃度5-50ppb（e.g. 水胺硫磷為25ppb）。

3、因為直接提取法結合固相萃取法的供試品溶液為2-5mL，所以1個樣品的供試品溶液可以分別供GC-MS/MS和LC-MS/MS的檢測需求。所以建議使用55種禁用農藥的混合標準品溶液，這樣可以減少一半的實驗量，提高工作效率。

QuEChERs：

1、取0.5mL 20-200ppm的混標溶液，乙腈稀釋至10mL，得到1-10ppm的加標用混合標準使用溶液。

2、稱取3.0g 樣品后，加入0.03mL 1-10ppm混標使用溶液（e.g. 水胺硫磷為5ppm），經前處理后，供試品溶液的上機濃度10-100ppb（e.g. 水胺硫磷為50ppb）。

3、因為QuEChERs方法的供試品溶液只有1mL，而GC-MS/MS需要加入0.3mL內標溶液，LC-MS/MS的檢測需要加入0.3mL純水，所以1個樣品的供試品溶液只能供一臺儀器的檢測需求。所以建議使用分組的混合標準品溶液，GC-MS/MS組35種禁用農藥混合標準品溶液、LC-MS/MS組31種禁用農藥混合標準品溶液。

以上加標方法僅為建議方法，各位老師也可以根據需求自行進行調整。例如使用QuEChERs方法也可以使用55種的禁用農藥混標，只需要做兩組加標樣品，分別供GC-MS/MS和LC-MS/MS檢測即可。

05 11種重復的化合物有推薦的檢測方法嗎?

55種禁用農藥中同時可以使用GC-MS/MS和LC-MS/MS檢測的化合物有久xiao磷、殺chong脒、苯xian磷、蠅du磷、zhi螟磷、甲ban磷、甲基yi柳磷、內xi磷（O+S）、滅xian磷和水胺硫磷共11個目標物。

這11個目標物選擇檢測儀器的原則是目標物的響應和回收率，不同基質可能選擇情況并不相同，主要是選擇一種響應較好，回收率符合要求的方法，兩種儀器只要選擇一種即可。

其中內xi磷（O+S）建議選擇LC-MS/MS檢測，因為內xi磷（O+S）在氣質上出兩個峰，而在液質上出一個峰，方便計算。

苯xian磷建議選擇LC-MS/MS檢測，因為氣質質只可檢測苯xian磷，而液質質可檢測苯xian磷、苯xian磷砜和苯xian磷亞砜三個目標物。

殺chong脒建議優先選擇LC-MS/MS，因為GC-MS/MS檢測基質干擾相對較多；水胺硫磷建議優先選擇GC-MS/MS，因為LC-MS/MS檢測基質干擾相對較多。

以上選擇僅為建議方法，中藥基質非常復雜，種類繁多，各位老師終還是要根據基質和前處理方法的實際情況進行儀器的選擇。

以上是小編關于《中國藥典》2020版 通則2341第五法 33種禁用農藥檢測用標準品的一些問題和建議，希望可以幫助各位老師和同仁更加清晰地了解標準，更加方便快速地開展實驗。