干貨丨流速慢、回收率低、平行性差？SPE操作技巧幫你輕松解決

       為什么SPE操作中會出現流速很慢或流速不一致、回收率低、平行性差的情況呢？這些問題可能很多小伙伴都遇到過。是小柱選擇不合適，方法有問題嗎？還是填料粒徑分布不均一，裝填松緊程度不穩定？其實SPE小柱每個批次的流速都有嚴格的質控范圍，質控范圍內的小柱能夠保證流速的穩定性，質控范圍之外的小柱會被作為異常品處理。那是不是采用穩定的方法，使用經出廠流速檢測合格的小柱就能*避免這些問題呢？

       其實還有一個非常容易被大家忽略的細節也會導致流速過慢：SPE小柱在運輸過程中篩板和填料可能會出現微小的松動，導致空氣進入填料（一般不容易被肉眼發現），含有空氣的填料在氣壓的作用下導致溶劑流下速度很慢。說到這里大家就能夠理解為什么同一批小柱會出現流速參差不齊的情況了。那我們在SPE實驗操作中如何解決這個問題呢？

一  排氣泡

1.1 排氣泡的方法

√ 正壓排除氣泡

       樣品數量比較少，填料量比較少，人工施加正壓比較方便的情況下，可以使用注射器連接轉接頭的方式進行正壓排除氣泡。

√ 負壓排除氣泡

       樣品數量比較大，填料量較多，人工施加正壓不方便的情況下，可以使用真空泵連接固相萃取裝置的方法，負壓排除氣泡。

1.2 何時排氣泡？

       SPE操作中，一般包含活化平衡、上樣、淋洗、洗脫四個步驟。是每一步都需要排氣泡嗎？當然不是，一般在填料之間有空隙的情況下需要進行排氣泡的操作，比如加入活化平衡溶液之后，就需要進行排氣泡的操作，使得溶液能夠更好的與填料接觸。

       還有一個容易被忽視的環節也是需要排氣泡的，一般淋洗后需要進行抽干操作，抽干后填料間也會有空氣進入，加入洗脫液后，也是需要進行排氣泡操作的，否則大量的氣泡也會嚴重影響洗脫液的流速以及洗脫效果。

1.3 排氣泡的注意事項

       排氣泡時，一般排除1/3柱管體積的溶劑即可排除填料中的氣泡，切記不可以將溶液排干。防止排干，手動排氣泡的速度不易過快，但也不能過慢，過緩的速度可能會排不出較大的氣泡。

       如果活化平衡溶液一不小心排干了怎么辦？只要重新加入活化溶劑進行排氣泡就可以了。

       正確的排除氣泡就可以在一定程度上避免流速過慢或流速不一致的情況了。那我們的回收率、平行性就能得到保證嗎？還有一個神奇的小操作——抽干，同時做好這兩步，才能讓我們得到一個更好的實驗結果。

二  抽干

 何時抽干？

× 活化平衡溶液、上樣液不需要抽干

       活化平衡過程的主要目的有兩個，一是清洗填料，洗去填料中本底，二是便于鍵合相分子的展開。主要是一些長鏈的官能團，例如C18在填料是干的情況下不是*展開的狀態，活化可以使填料官能團濕潤和舒展，使之保持對目標化合物的大吸附活性。

       所以活化平衡過程是不需要進行抽干的。

       有小伙伴曾經問到上樣液是否需要抽干操作？上樣液與淋洗液的極性一般是比較相似的，所以上樣液也是不需要進行抽干的。

√ 淋洗液、洗脫液需要抽干

       淋洗液需要抽干的原因主要有兩個：

       ①一般淋洗液與洗脫液的極性相差會較大（如淋洗液是水，洗脫溶劑為正己烷或二氯甲烷），兩種溶劑不互溶或溶解性較差，這會導致洗脫液流不下來或流速較慢，阻礙洗脫溶劑與目標物的接觸，洗脫效果差，回收率低。

       ②淋洗液如果是水的話，不進行抽干，會有部分被收集到洗脫液中，洗脫液如果進行氮吹的話，含水的洗脫液也是很難進行吹干的，如果進行長時間的氮吹將少量的水溶液吹干的話會導致回收率偏低的情況出現，所以淋洗之后是需要進行抽干操作的。

       洗脫之后會有部分洗脫溶劑殘留在填料上，填料量較多的時候，甚至會殘留1~2mL的洗脫液，無法*回收洗脫液，導致回收率低，平行性差。為了保證洗脫溶劑與目標物*被回收也是需要進行抽干的。

總結

√ 活化平衡、洗脫前進行排氣泡。

√ 淋洗、洗脫后進行抽干。